临床基因扩增实验（PCR）在病毒检测中的应用与重要性解析

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    1. 概述

    临床基因扩增实验又称PCR实验，是专门用于检测艾滋病、乙型肝炎、禽流行病等病毒传染病的检测方法。它可以通过扩增病毒所含的基因来检测一些病毒含量较低的感染者是否含有特定病毒。更能检测人体内是否存在近期新型冠状病毒肺炎。

    由于这种检测方法可以检测出普通检测难以检测到的病毒，且具有灵敏度高、特异性高、速度快、样本要求低等优点，受到临床医生的广泛认可，已广泛应用于医院的临床诊断中。 。以及各防疫检测部门的禽病诊断。但这种实验需要一个能够保证绝对安全、配置合理、操作非常规范的实验室。

    PCR扩增图

    近年来，临床基因扩增检测实验室的建设越来越受到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起着至关重要的作用。

    本文主要从临床基因扩增检测实验室平面布局、空调通风系统设计、气流控制及污染防治等方面阐述了实验室设计的主要特点。

    临床基因扩增检测实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此，实验室布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这一核心问题展开的。下面将分别对这几个方面进行说明。

    2. PCR实验室布局

    临床基因扩增检测实验室原则上分为四个独立的工作区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配置和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入每个工作区域必须严格遵循一个方向，即只能从试剂储存和制备区域-标本制备区域-扩增反应混合物配置和扩增区域-扩增产物分析区域。

    实验区域之间试剂和样品的传递应通过传递窗进行。

    3、实验室空调通风系统设计及压力控制

    PCR实验室没有严格的净化要求，但为了避免各实验区域之间交叉污染的可能性，建议采用全进风、全排风的气流组织。同时，必须严格控制送风和排风的比例，保证各实验区的压力要求。

    1.试剂储存​​和准备区

    本实验区的主要操作是储存试剂的制备、试剂的包装和主反应混合物的制备。标本制备所用的试剂和材料应直接运输至该区域，不得途经其他区域。该区域必须存放试剂原料，并在此区域准备所需的储存试剂。

   

    该区对气流压力的控制没有严格要求。

    2. 标本制备区

    该区域的主要操作是临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）的提取和储存，以及添加到扩增反应管中并测量RNA时合成cDNA。

    该区域的压力梯度要求为：相对邻近区域为正压，以避免气溶胶污染从邻近区域进入该区域。此外，由于在样品添加操作过程中可能会发生气溶胶污染，因此应避免在该区域进行不必要的移动。

    3. 扩增反应混合物制备和扩增区域

    该区域执行的主要操作是DNA或cDNA扩增。此外，制备好的DNA模板和合成的cDNA（来自样品制备区）的添加以及主反应混合物（来自试剂储存和制备区）制备成反应混合物也可以在该区域中进行。在巢式 PCR 检测中，通常必须在第一轮扩增后打开反应管。因此，嵌套扩增的污染风险较高，第二次加样必须在此区域进行。

    该区域的压力梯度要求为：相对邻近区域为负压，以避免该区域气溶胶泄漏。为避免气溶胶造成污染，应尽量减少该区域不必要的活动。添加样品等个别操作应在洁净的工作台上进行。

    4.扩增产物分析区

    该区域执行的主要操作是扩增片段的测定。若采用全自动密闭分析仪器进行检测，则无需设置该区域。

    该区域是扩增产物污染的主要来源，因此该区域的压力梯度要求为：相对邻近区域为负压，以防止扩增产物从该区域扩散到其他区域。

    四、污染防治

    PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。实际工作中，常见的污染类型有： 扩增产物的污染；天然基因组 DNA 的污染；试剂污染和标本之间的污染。一旦发生污染，必须停止实验，直至找到污染源，实验结果必须作废，并重新进行实验。因此，污染发生后，在实验室寻找污染源不仅费时而且麻烦，浪费人力物力。因此，要避免污染，首先要预防，而不是消除。

    1、严格划分工作区域

    （一）各实验区设置合理；

    （2）每个实验区域必须有明显的标识（如醒目的门牌号或不同的地板颜色等），避免不同实验区域的设备、物品、试剂等混淆。

    2.合理的系统设置

    （1）合理的空调、通风系统设置，尽量采用送排风充分的空调系统；

   

    (2)严格的气流压力控制，保证不同实验区域不同的压力要求。

    3、标准化操作

    （一）临床基因扩增检测实验室的技术人员必须经过岗位培训，培训合格后才能从事临床基因扩增检测工作；

    (2)实验操作过程中，操作人员必须戴手套并经常更换。另外，操作时使用一次性瓶盖也是防止污染的有效措施；

    (3)清洁工作及时、正确。实验工作完成后，必须立即清理该区域。一些实验器具除了用常规消毒液擦拭表面或用紫外线消毒外，还应采用高压消毒。

    4、严格管理

    （一）严格控制人员进出实验室。与实验无关的人员不得随意进出实验室。如有可能，整个实验区必须设置独立的通道和门；

    （2）各实验区域使用有明显区别标志（如不同颜色）的工作服。员工离开时，不得将该区域的工作服带到其他区域；

    （3）尽量减少实验区内不必要的活动，减少交叉污染的可能性；

    (4)扩增产物分析区是扩增产物污染的主要来源。废液不得倾倒在实验室内。必须用消毒剂浸泡和消毒，然后从实验室丢弃。用过的移液器吸头及其他一次性材料也应用消毒剂浸泡消毒后统一处理，如焚烧；

    (5)扩增产物分析区域可能使用某些致突变、有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。

    5、实验室配套设施齐全

    齐全的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件。根据各实验室不同的实验内容，配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、进样器等。

    广州嘉东，专业实验室服务商，拥有实验室建设资质和实验室相关专利；我们的核心技术主要是实验室规划设计、生产安装、施工装修、认可认证等综合性一站式服务。为您打造一个科学、舒适、安全的实验室是我们的追求。

    结尾

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